丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)测定意义: 丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1)是 C4 途径和景天科酸代 谢途径的限速酶,催化 ATP、丙酮酸和 Pi 经三步反响生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存 在于 C4 植物的叶绿体基质中,对光合功用具有重要调理作用。 测定原理: PPDK 的逆向反响催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和 PPi 生成丙酮酸、ATP 和 Pi,乳酸脱氢 酶进一步催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+,在 340nm 测定 NADH 减少速率,计算 PPDK 活性。 测定步骤和加样表: 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调理波长至 340nm,蒸馏水调零。 2、 样本测定 (1)工作液的配制:临用前取试剂二一瓶参加 10mL 试剂一和 5μL 试剂三,充沛混匀,置 于 37℃水浴 5min;用不完的试剂分装后-20℃保管,制止重复冻融。 (2)在微量石英比色皿或 96 孔板中参加 10μL 样本和 190μL 工作液,混匀,立刻记载 340nm 处初始吸光值 A1 和 37℃反响 5min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。
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