NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)
测定意义 细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,药物在动物体内的I相反响主要依赖细胞色素P450酶催化完成,许多药物能诱导或抑止细胞色素P450的活性,从而惹起药物的疗效降低、中毒和残留发作率的增加。NADPH-细胞色素C复原酶作为P450酶系的一员,担任将氧化型P450转变成复原型。 测定原理 NADPH-细胞色素c复原酶催化氧化型细胞色素c生成复原型细胞色素c,后者在550nm处有特征吸收峰,经过测定复原型细胞色素c的增加速率,计算NADPH-细胞色素c复原酶活性。 测定操作: 1.分光光度计预热30min,调理波长到550nm,蒸馏水调零。 2.试剂二在37℃水浴中预热30min。 3.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次参加50μL蒸馏水、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,疾速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值分别记为A1和A2,△A空白管=A2-A1。 4.测定管:取1mL玻璃比色皿,依次参加50μL粗酶液、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,疾速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值分别记为A3和A4,△A测定管=A4-A3。 留意:空白管只需求做一次。
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